生理生化檢測服務提供人,小鼠,大鼠,兔,植物等多個物種的多種生理生化指标檢測。詳情聯系。
Elisa檢測方法作爲生理生化指标檢測的主要方法,針對不同樣本的處理方案如下:
ELISA實驗的樣本準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝後凍存在-20℃備用,有條件的,最好-70℃凍存備用。标本應避免反複凍融。液體類标本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。2. 血漿:根據标本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作爲抗凝劑,混合10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。3. 尿液:用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。5. 培養細胞檢測細胞内的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反複凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞内成份。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。6. 組織标本切割标本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器将标本勻漿化。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘冷凍備用。7.土壤直接用PBS提取就是跟組織勻漿一樣,提取1g土壤,加9ml的勻漿液比例爲1:98.糞便一般稱取重量爲1g左右(不少于50mg)然後按照10%的比例進行勻漿處理,離心提取上清液即可。10%的比例即爲1g糞便樣本加9ml的勻漿液,勻漿液選取的是生理鹽水或者PBS緩沖液(pbs濃度爲0.01mol,PH=7.4)9.植物組織勻漿處理原則 植物組織要保持新鮮,植物組織重量不少于50mg,勻漿比例按照10%,即1g組織加9ml勻漿液,勻漿液選取磷酸鹽緩沖液,緩沖爲PBS(ph7.2-7.4)濃度爲0.01mol/L。